Papel de SPRY1 en la patogénesis del sarcoma de Ewing: implicaciones pronósticas y terapeúticas - Cidre-Aranaz, Florencia ([Verlag nicht ermittelbar], 2017)
Tesis Doctoral inédita leída en la Universidad Autónoma de Madrid, Facultad de Ciencias, Departamento de Biología Molecular. Fecha de lectura: 24-10-2016 ; El sarcoma de Ewing se caracteriza por la presencia de translocaciones cromosómicas que originan genes de fusión entre el gen EWSR1 y diferentes miembros de la familia de factores de transcripción ETS, principalmente FLI1. El gen de fusión resultante, EWS-FLI1, es un factor de transcripción aberrante que desempeña un papel central en el origen del sarcoma de Ewing a través de la regulación transcripcional de otros genes diana. En esta Tesis mostramos que Sprouty 1 (SPRY1), un inhibidor downstream de los receptores del factor de crecimiento fibroblástico (FGFRs) y otros receptores activadores de Ras, es un gen regulado negativamente por EWS-FLI1 en células de sarcoma de Ewing A673. El análisis de la expresión de SPRY1 en una selección de células de sarcoma de Ewing mostró que SPRY1 no se expresa en estas líneas celulares, lo que sugiere que SPRY1 podría actuar como un supresor tumoral en células de sarcoma de Ewing. En concordancia con estos resultados, la re-expresión de SPRY1 inhibió la proliferación, el crecimiento clonogénico y la migración en tres líneas celulares diferentes de sarcoma de Ewing. Además, la re-expresión de SPRY1 inhibió la ruta de señalización de Ras/MAPK/ERK inducida por suero o FGFb. Por otro lado, al tratar las células de sarcoma de Ewing con el inhibidor de FGFR PD173074, se redujo la proliferación inducida por FGFb, la formación de colonias y el crecimiento de tumores in vivo de forma dependiente de dosis. Aunque la expresión de SPRY1 en células de sarcoma de Ewing es baja, SPRY1 se expresa de forma variable en las muestras de tumores primarios. El análisis de una cohorte grande de pacientes indica que los pacientes con tumores que presentaron una expresión mayor de SPRY1 tuvieron un mejor pronóstico. En resumen, los resultados mostrados en esta Tesis indican que la regulación negativa de SPRY1 mediada por EWS-FLI1 produce una desregulación de la proliferación celular inducida por FGFb, lo que sugiere que la ruta de señalización de FGFR/Ras/MAPK/ERK podría ser una diana interesante para el desarrollo de nuevas aproximaciones terapéuticas para esta devastadora enfermedad. ; Ewing sarcoma is characterized by chromosomal translocations fusing the EWSR1 gene with various members of the ETS family of transcription factors, most commonly FLI1. EWS-FLI1 is an aberrant transcription factor driving Ewing sarcoma tumorigenesis by either transcriptionally inducing or repressing specific target genes. Herein, we showed that Sprouty 1 (SPRY1), which is a physiological negative feedback inhibitor downstream of fibroblast growth factor (FGF) receptors (FGFRs) and other Ras-activating receptors, is an EWS-FLI1 repressed gene. EWS-FLI1 knock-down specifically increased the expression of SPRY1 while other Sprouty family members remained unaffected. Analysis of SPRY1 expression in a panel of Ewing sarcoma cells showed that SPRY1 was not expressed in Ewing sarcoma cell lines, suggesting that it could act as a tumor suppressor gene in these cells. In agreement, induction of SPRY1 in three different Ewing sarcoma cell lines functionally impaired proliferation, clonogenic growth and migration. In addition, SPRY1 expression inhibited ERK/MAPK signalling induced by serum and basic FGF (bFGF). Moreover, treatment of Ewing sarcoma cells with the potent FGFR inhibitor PD173074 reduced bFGF-induced proliferation, colony formation and in vivo tumor growth in a dose-dependent manner, thus mimicking SPRY1 activity in Ewing sarcoma cells. Although the expression of SPRY1 was low when compared to other tumors, SPRY1 was variably expressed in primary Ewing sarcoma tumors and higher expression levels were significantly associated with improved outcome in a large patient cohort. Taken together, our data indicate that EWS-FLI1-mediated repression of SPRY1 leads to unrestrained bFGF-induced cell proliferation, suggesting that targeting the FGFR/Ras/MAPK/ERK pathway can constitute a promising therapeutic approach for this devastating disease. ; A la Red Temática de Investigación Cooperativa en Cáncer (RTICC) por la financiación concedida (RD12/0036/0027). Me gustaría agradecer en especial a la Asociación Pablo Ugarte por su fantástica labor, por haber depositado su confianza en nosotros y por haber financiado de forma sostenida este proyecto (TPY-M 1149/13)